结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB/c小鼠1个月后,将小鼠随机分成2组,第1组用利福平(RFP)、异烟肼(INH)治疗12周,第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗(免疫5次)联合治疗12周;治疗结束后4和8周,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数。结果治疗结束后4和8周,第2组小鼠体质量均超过第1组,但无显著性差异(P>0.05)。治疗结束后4周,第2组肺、脾脏指数(0.017,0.011)均略低于第1组(0.020,0.012)(P>0.05);治疗结束后8周,第2组肺、肝脏指数(0.021,0.047)均略低于第1组(0.022,0.048)(P>0.05);而第2组脾脏指数(0.008)显著低于第1组(0.012)(P<0.05)。治疗结束后4周,第2组有4例脾脏未见明显病变,第1组仅1例脾脏未见明显病变;治疗结束后8周,第2组有1例肺门淋巴结肿大,而第1组有3例;第2组有5例脾脏未见明显病变,第1组仅2例脾脏未见明显病变。治疗结束后4周,第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少,分别减少70%和80%。结论DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗。     

母牛分枝杆菌菌苗辅助治疗初治菌阳肺结核的临床分析

目的　观察和评价母牛分枝杆菌菌苗 (微卡菌苗)在初治菌阳肺结核治疗中的作用。方法 采用随机配对分组法,分微卡菌苗治疗组 (A组,84例 )和对照组 (B组,84例 )。 2组化疗方案均为2HRZE 4HR,A组加用微卡菌苗治疗 2月,B组不用微卡菌苗。结果 A组第 1月涂片阴转率36.9%,培养阴转率 47.6%;第 2月涂片阴转率 79.8%,培养阴转率 85.7%。B组第 1月涂片阴转率19.0%,培养阴转率 17.9%;第 2月涂片阴转率 53.8%,培养阴转率 67.9%。前 2月痰菌阴转率A组显著高于B组 (P＜0.01 )。疗程满 6个月后A组涂片阴转率 98.8%,培养阴转率 97.6%;B组涂片阴转率 96.4%,培养阴转率 97.6%。A组和B组治疗 6个月痰菌阴转率无显著性差异 (P＞0.05)。病灶吸收好转及空洞缩小关闭速度,A组优于B组。A组的细胞免疫功能显著改善。随访A组和B组的细菌学复发率分别为 1.3%和 2.6% (P＞0.05)。结论 微卡菌苗能改善初治菌阳肺结核患者的细胞免疫功能,加快痰菌阴转、病灶吸收及空洞缩小关闭的速度,不良反应少且轻微。微卡菌苗可用作初治菌阳肺结核的免疫治疗。     

结核分枝杆菌L型的垂直感染及其对子代小鼠的影响

目的　研究结核分枝杆菌L型的垂直感染及其对子代小鼠的影响。方法　将C5 7BL/ 6N小鼠 (雌∶雄 3∶2 )随机分成 4组 ,分别用自肺癌患者血中分离的结核分枝杆菌L型 (B组 ) ,牛型分枝杆菌 (A组 )及其L型 (C组 )经尾静脉进行感染 ,并用生理盐水注射组作为对照 ,观察感染鼠子代新生鼠和子代成年鼠的病理学改变 ,同时采用培养法、IK抗酸染色和免疫组织化学技术检查组织内的抗酸杆菌及其L型。结果　感染鼠的肺、肝、肾、脑、心等主要脏器组织均发生间质性炎症 ,并有多只小鼠伴有肝脏和卵巢的瘤样增生。新生子鼠中 ,A和B组有间质性炎症表现 ,B组有一例肝瘤样增生 ,C组有一例畸胎 ,组织内有多种形态的分枝杆菌L型 ;成年子鼠中A组有两只良性畸胎瘤。结论　血源性结核分枝杆菌L型和牛型分枝杆菌L型仍有一定的致病性并可能诱导肿瘤发生。通过垂直感染 ,结核分枝杆菌L型可导致子代小鼠的病变。     

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的　构建结核分枝杆菌早期分泌蛋白Ag85B和MPT6 4融合基因 (AM )及其原核表达质粒并进行表达。方法　采用 geneSOEing法将ag85b和mpt6 4用疏水甘氨酸接头 (Gly4Ser) 3 融合 ,经限制性内切酶切后克隆入原核表达载体pET32a中 ,进行酶切、PCR鉴定和DNA序列测定。将重组质粒转染Ecoli BL2 1,经过IPTG诱导后其表达产物进行SDS -PAGE和免疫印迹分析。结果　AM融合基因定向克隆入 pET32a中 ,双向测序验证碱基突变率为 0 11% (2 / 170 7) ,均为无意义突变。SDS -PAGE和免疫印迹分析结果均显示在约 73kDa的位置可见明显的蛋白条带。结论　成功地构建了ag85b -mpt6 4融合基因及其原核表达质粒 ,重组质粒能够在大肠杆菌在中表达。     

DNA序列分析与PCR-SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较

目的　了解DNA序列分析与PCR-SSCP法分析利福平敏感性的价值。方法 应用DNA序列分析与PCR-SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株 25株、耐药株 41株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况。 结果 25株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变,41株耐利福平株中 38株发生突变,突变率为 92.7% (38/41);25株利福平敏感的结核分支杆菌菌株PCR-SSCP带型与对照H₃₇R_v株相同,41株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP带型不同于对照株,提示有突变存在。与DNA序列分析相比,PCR-SSCP检测准确率为 93.9% (62/66),敏感度为 92.1% (35/38);特异度是 96.4% (27/28)。结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值;PCR-SSCP可用于利福平耐药结核分支杆菌的初步筛选。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

BACTEC-MGIT960快速培养药敏对肺结核诊治的应用和评价

目的　BACTEC-MGIT960快速培养药敏在肺结核诊治中的应用评价。方法 采用BACTEC-MGIT960进行快速培养药敏,并与改良罗氏培养基和改良7H9培养基进行比较。结果 BACTEC-MGIT960培养报告时间仅8.5d,明显短于改良7H9培养基(20.6d)和改良罗氏培养基(30.8d)。BACTEC-MGIT960药物敏感试验结果与其它检测方法相比,符合率在90%以上,平均报告时间仅6.5d,明显短于改良7H9培养基(17d)和改良罗氏培养基(26.5d)。结论 BACTEC-MGIT960快速培养药敏有助于肺结核的诊断和治疗,是一种快速、有效、可靠的方法。     

改良抗酸染色法在结核性浆膜炎临床诊断中的价值

目的 应用改良的抗酸染色法(改良法)对确诊的结核性浆膜炎患者进行回顾性诊断,并与传统的抗酸染色法(传统法)相比较,以评估改良法对结核性浆膜炎的临床诊断价值。 方法 48例确诊结核性浆膜炎患者的浆膜腔积液同时送检改良法和传统法。其中,胸腔积液33例,腹腔积液15例。全部患者浆膜腔积液均为首次采集,采集时未经抗结核治疗(未治疗)患者28例,已进行抗结核治疗(已治疗)患者20例。 结果 48例患者改良法和传统法抗酸杆菌检出率分别为58.33%(28/48)和6.25%(3/48),两者差异有统计学意义(P=0.000);28例未治疗患者改良法抗酸杆菌检出率为71.43%(20/28),显著高于传统法3.57%(1/28,P=0.000);已治疗患者改良法抗酸杆菌检出率为40%(8/20),明显低于未治疗患者(P<0.05)。改良法和传统法阳性标本细胞外均检出抗酸杆菌,改良法检出胞内菌,传统法则均未检出。 结论 改良法显著提高了抗酸杆菌的检出率。而胞内菌的检出,对于判定细菌的存在则更具特异性。改良法极大地提高了诊断率,对于结核性浆膜炎患者的早期诊断和治疗,具有很高的临床应用价值。     

Triton X-100浸出抗原ELISA检测牛结核

用Triton X-100自牛分枝杆菌(M.bovis)浸出物为抗原,建立了ELISA检测牛结核血清抗体的方法,阴性平均OD值(?)为0.09,标准差(SD)为0.10,以(?)+3SD为临界值检测了结核菌素(OT)变态反应阳性牛118头,ELISA阳性率为60％;检测健康牛的阴性符合率为97.1％,假阳性率2.9％,与其它疾病的交叉反应为1.75％。ELISA与病变及细菌培养有较高的符合率。     

Potential source of human exposure to Mycobacterium bovis in Burkina Faso, in the context of the HIV epidemic

Objective: To identify potential sources of human Mycobacterium bovis infection in Bobo-Dioulasso, Burkina Faso.
Methods: A tuberculin survey among 174 cattle was performed. Mycobacteriologic identification in 64 samples of pooled milk, and in 199 tissue samples collected from the slaughterhouse of Bobo-Dioulasso, Burkina Faso, was also done. We retrospectively analyzed the distribution of tuberculosis (TB) cases on 1140 clinical records according to professional occupation and to ethnic group. The frequency of pulmonary and extrapulmonary TB was related to potential exposure and route of transmission of M. bovis from animals.
Results: Out of six herds (total 170 bovines), only one was free of any positive tuberculin test. Among 199 bovines which had been slaughtered over four consecutive nights, 38 (19%) had morphologic lesions suggestive of TB; 17 (45%) of those were positive for acid-fast bacilli by microscopic examination on one of their lesions, and 20 samples (53%) presented a positive culture for a pathogenic mycobacterium, including M. bovis and M. tuberculosis. In the retrospective analysis, Peuls more frequently had a pulmonary form of disease. This may be related to the route of transmission.
Conclusions: Attention has to be paid to human TB of bovine origin in Burkina Faso. The identification of M. tuberculosis in milk and in tissue samples raises the question of the transmission of TB from humans to cattle.